产品简介:
实验用高糖高脂细胞添加剂的有效成分是棕榈酸钠(Sodium palmitate,10mmol/L)和葡萄糖(Glucose,1mol/L)。
本产品包含高脂溶剂和高糖溶剂对照,同时用于实验可排除胶体和晶体渗透压的影响。
本产品所用溶剂不含NaOH或有机溶剂,对细胞无毒性。
本产品适用于所有类型的细胞,可用于诱发细胞脂毒性、诱导内质网应激、氧化应激、线粒体损伤、细胞凋亡等,见效果图1和图2及参考文献。

图1. 高糖高脂细胞添加剂剂量依赖性诱导心肌细胞凋亡。分别给予H9C2心肌细胞30mmol/L葡萄糖和100、200、300、400μmol/L梯度浓度的棕榈酸钠(High lipid)、溶剂对照(Control)或空白对照(Blank),24小时后,进行Annexin V-FITC(横坐标)、碘化丙啶(Propidium iodide, PI,纵坐标)双染,采用流式细胞仪检测细胞凋亡(Annexin V-FITC阳性、PI阴性,右下象限黑色框内),图A~图G是流式细胞检测结果,图H是细胞凋亡率的统计结果。

图2. 高糖高脂细胞添加剂剂量依赖性诱导内皮细胞凋亡。分别给予小鼠主动脉内皮细胞30mmol/L葡萄糖和100、200、300、400μmol/L梯度浓度的棕榈酸钠(High lipid)、溶剂对照(Control)或空白对照(Blank),48小时后,采用Western blotting法检测Cleaved caspase-3的蛋白水平。图A是Western blotting检测结果,β-actin是参照蛋白,图B是统计结果。
使用说明:
针对不同细胞种类及实验目的,棕榈酸钠所用浓度不同,一般与培养基总体积按1:100-1:20稀释,终浓度为100-500umol/L。葡萄糖终浓度一般为25-30mmol/L,但需考虑培养基中现有葡萄糖的浓度。
对于首次使用本产品,建议采用浓度梯度处理细胞,摸索针对特定细胞、达到特定效果的适宜浓度。处理时间上可通过镜下观察细胞状态初步判断,一般20-48小时为宜。
本产品经0.22μm滤器过滤除菌,待细胞生长至80-100%汇合度时,换成新鲜含血清(一般10%)培养基,按适当浓度滴加棕榈酸钠和葡萄糖溶液,对照组加入等量高脂和高糖对照,轻柔混匀后将细胞放入细胞孵箱中继续培养。
如需检测细胞活力(CCK-8和MTT),高脂试剂和溶剂对照处理后,加入CCK-8和MTT前,需用PBS清洗2次,以去除溶剂对照和高脂试剂对吸光度的影响。